步驟1:檢查氣體過濾器、載氣、進(jìn)樣墊和襯管等。 檢查氣體過濾器和進(jìn)樣墊,保證輔助氣和檢測器的通氣暢通,如果以前做過較臟樣品或活性較高的化合物,需要將進(jìn)樣口的襯管清洗或更換。
步驟2:將螺母和密封墊裝在色譜柱上,并將色譜柱兩端小心切平,切面要平滑整齊。
步驟3:將色譜柱連接于進(jìn)樣口上。 色譜柱在進(jìn)樣口中插入的深度應(yīng)根據(jù)所使用的GC儀器不同而定,正確合適的插入能大可能地保證試驗結(jié)果的重現(xiàn)性。通常,色譜柱的入口應(yīng)保持在進(jìn)樣口的中下部,即處于進(jìn)樣針穿過隔墊*插入進(jìn)樣口后針尖與色譜柱入口相距1~2cm,(具體的插入程度和方法參考所使用GC的隨機手冊)。
避免用力彎曲擠壓毛細(xì)管柱,并小心不要讓標(biāo)記牌等帶有鋒利邊緣的物品與毛細(xì)管柱接觸摩擦,以防毛細(xì)管柱斷裂受損。
色譜柱正確插入進(jìn)樣口后,將連接螺母擰上,擰緊后(用手?jǐn)Q不動了)用扳手再多擰1/4—1/2圈,保證安裝的密封程度。不緊密的安裝,不僅會引起裝置的泄漏,而且有可能對色譜柱造成*損壞。
步驟4:接通載氣。 當(dāng)色譜柱與進(jìn)樣口接好后,通入載氣,調(diào)節(jié)柱前壓以得到合適的載氣流速。
將色譜柱的出口端插入裝有已烷的樣口瓶中,正常情況下可以看見瓶中穩(wěn)定持續(xù)的氣泡。如果沒有氣泡就要重新檢查載氣裝置和流量控制器等是否設(shè)置正確,并檢查整個氣路有無泄漏,待所有問題解決后,將色譜柱出口從瓶中取出,保證柱端口無溶劑殘留,再進(jìn)行下一步的安裝。
步驟5:將色譜柱連接于檢測器上。 色譜柱與檢測器的連接安裝和所需注意的事項和色譜柱與進(jìn)樣口連接大致相同。如果在應(yīng)用中系統(tǒng)所使用的ECD或NPD等,那么在老化色譜柱時,應(yīng)該將色譜柱與檢測器斷開,這樣檢測器可避免被污染。
步驟6:確定載氣流量,再對色譜柱的安裝進(jìn)行檢查。 注意:如果不通入載氣就對色譜柱進(jìn)行加熱,會快速且*性的損壞色譜柱。
步驟7:色譜柱的老化。 色譜柱安裝和系統(tǒng)檢漏工作完成后,就可以對色譜柱進(jìn)行老化,對色譜柱加熱至一恒定溫度,通常取其溫度上限。特殊情況下,可加熱至高于高使用溫度10~20℃左右,但是一定不能超過色譜柱的溫度上限否則極易損壞色譜柱。當(dāng)達(dá)到老化溫度后,記錄并觀察基線,初始階段基線應(yīng)持續(xù)上升,在達(dá)到老化溫度后5~10min開始下降,并且會持續(xù)分鐘,當(dāng)達(dá)到一個固定的值后就會穩(wěn)定下來。如果在小時后基線仍無法穩(wěn)定,或者在15~20分鐘后仍無明顯的下降趨勢,那么有可能系統(tǒng)裝置有泄漏或者污染。遇到這樣的情況,應(yīng)立即將柱溫降到40℃以下,盡快地檢查系統(tǒng)并解決相關(guān)的問題,如果還是繼續(xù)老化,不僅對色譜柱有損壞而且始終得不到正常穩(wěn)定的基線。
一般來說,涂有極性固定相和較厚涂層的色譜柱老化時間較長,而弱極性固定和較薄涂層的色譜柱所需時間較短。而PLOT色譜柱的老化方法有各不相同,須按色譜柱供應(yīng)商提供的老化條件進(jìn)行老化。
PLOT柱的老化步驟:
AT·Pora系列 250℃ 8h以上
Molecular Sieve(分子篩) 350℃ 12h
Alumina(氧化鋁) 200℃ 8h以上
由于水在氧化鋁和分子篩PLOT柱中的不可逆吸附,使得這兩種色譜柱容易發(fā)生保留行為漂移,當(dāng)柱子分離過含有高水份樣品后,需要將色譜柱重新老化,以除去固定相中吸附的水分。
步驟8:設(shè)置確認(rèn)載氣流速。 對于毛細(xì)管色譜柱使用載氣選擇高純度氮氣或氫氣,載氣的純度好大于99.95%,而其中的含氧量越小越好。
如果您使用的是毛細(xì)管色譜柱,那么依照載氣的平均線速度(cm/s),而不是利用載氣流量(ml/min)來對載氣做出評價,因為柱效的計算采用的是載氣平均線速度。推薦平均線速度值:氮氣:10~20cm/s 氫氣:20~25cm/s
在載氣的管線中加入氣體過濾裝置不僅可以延長色譜柱壽命,而且很大程度地降低了背景噪音,建議好安裝一個高容量脫氧管和一個載氣凈化器。使用ECD系統(tǒng)時,好能在其輔助氣路中也安裝一個脫氧管。
步驟9:柱流失檢測。 在色譜柱老化過程結(jié)束后,采用程序升溫作一次空白試驗(不進(jìn)樣),一般是以10℃/min從50℃升到高使用溫度,達(dá)到高使用溫度后保持10min,這樣我們就會得到一張流失圖。這些數(shù)值可以后作對比試驗,并且對實驗問題的解決有幫助。
在空白試驗的色譜圖中,不應(yīng)該有色譜峰出現(xiàn),如果出現(xiàn)了色譜峰,通??赡苁菑倪M(jìn)樣口帶來的污染物。如果在正常的使用狀態(tài)下,色譜柱的性能開始下降,基線的信號值會增高。另外,如果在較低的溫度下,基線信號值明顯大于初始值,那么有可能是色譜柱和系統(tǒng)有污染。